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RIPA裂解液（弱）說明書
RIPA Lysis Buffer
目錄號：K2335
保存條件：4℃保存。
組分說明
Cat. No. K2335
Volume 100 ml
本產品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途產品簡介
RIPA裂解液是一種傳統(tǒng)的組織以及細胞快速裂解液，主要用于從動物組織和哺乳
動物細胞中抽取可溶性蛋白，可用于裂解貼壁細胞和懸浮細胞。按照其裂解液的強度
可以分為強、中、弱三類，具體特點和差異請參考附表2，可根據實驗需求選擇相應產
品。經RIPA裂解液（弱）提取的蛋白可應用于蛋白定量、Western、IP等，特別適合
于CO-IP檢測。
RIPA裂解液裂解RIPA裂解液（弱）的主要成分為50mM Tris（pH 7.4），150mM
NaCl，1% NP-40，0.25% sodium deoxycholate，以及sodium orthovanadate，sodium
fluoride，EDTA，leupeptin等多種抑制劑，可以有效抑制蛋白降解。
注意事項
1．為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進行。
2．使用RIPA裂解液得到的蛋白樣品，可采用BCA法進行蛋白定量，以測定蛋白濃度。
產品可單獨向本公司訂購，如：YJ0014 BCA蛋白定量試劑盒。本品含有高濃度的
去垢劑，不能用Bradford法進行蛋白定量。
3．建議在使用RIPA裂解液前，向溶液中加入蛋白酶抑制劑或磷酸酶抑制劑，以防止蛋
白降解，或保持蛋白的磷酸化狀態(tài)。產品可單獨向本公司訂購，如：YJ2200 蛋白酶抑制劑混合物，YJ2383 磷酸酶抑制劑混合物。
4．若需獲得更高濃度的蛋白，應減少哺乳動物蛋白抽提試劑的使用量。
5．對于培養(yǎng)瓶中的貼壁細胞，推薦先使用常規(guī)方法消化細胞，再參考懸浮細胞蛋白提
取步驟操作。
6．對于離心獲得的細胞，若不確定細胞體積，可根據細胞數(shù)量計算RIPA裂解液的使用
量。如5×106個Hela細胞約需加入500 μl RIPA裂解液，以此類推。
操作步驟
I 細胞樣品
· 貼壁細胞蛋白抽提
1．小心傾去貼壁細胞的培養(yǎng)液。
2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請先使用預冷的
PBS漂洗細胞。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑），試劑使用量請參考
附表1，在冰上用槍頭吹打貼壁細胞。
表 1 貼壁細胞RIPA 裂解液使用量推薦表
細胞培養(yǎng)板類型或培養(yǎng)面積 RIPA 裂解液使用量
100 mm* 500-1,000 µl
60 mm 250-500 µl
6 孔培養(yǎng)板 200-400 µl /孔
24 孔培養(yǎng)板 100-200 µl /孔
96 孔培養(yǎng)板 50-100 µl /孔
* 對于100 mm培養(yǎng)板培養(yǎng)的107個細胞 (50 mg)可裂解獲得約3 mg總蛋白（細胞類型不同略有差異）。
4．將裂解液轉移至新的離心管中，冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
· 懸浮細胞蛋白提取
1．懸浮細胞2,500×g，離心5分鐘，棄去上清。
2．可選步驟：若培養(yǎng)基中含有酚紅或其他可能影響實驗結果的物質，請使用PBS漂洗
細胞。漂洗后的細胞懸浮液2,500×g離心5分鐘，棄去上清。
3．加入適量RIPA裂解液（使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑），每5×106細胞加入約
200-500 µl RIPA裂解液，吹打均勻。
4．冰上放置20分鐘，使細胞充分裂解。
5．14,000×g離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
II 組織樣品
1．取適當?shù)腞IPA裂解液，在使用前2-3分鐘內加入蛋白酶抑制劑。
2．稱量實驗組織的重量，按照1：10（g/ml）的比例加入RIPA裂解液后將組織剪成細
小碎片，用電動勻漿器勻漿處理。若需要濃縮的蛋白提取物，可適當減少組織蛋白
抽提試劑使用量。
3．冰上孵育20分鐘，使細胞充分裂解。
4．14,000×g 離心10分鐘。轉移上清液至新管中，進行下一步分析。
注：RIPA裂解液的裂解產物中可能會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為基因組。
相關產品信息
目錄號 產品名稱
K2333 RIPA裂解液（強）
K2334 RIPA裂解液（中）
K2335 RIPA裂解液（弱）
K2336 RIPA裂解液（強中弱套裝）
K2337 SDS裂解液
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