CCK-8試劑盒中含有WST–8：化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪 *（1-Methoxy PMS）的作用下被細(xì)胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產(chǎn)物（Formazan），生成的甲臜物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。該方法已被廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞增殖試驗(yàn)、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及藥敏試驗(yàn)等。
CCK-8試劑盒操作較繁雜,在操作中應(yīng)留神以下5個方面：
1. 跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動搖，因此有必要對標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。
2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在CCK-8試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時則不需更換吸嘴。
3.在成批手藝檢測中，還應(yīng)留神操作時差的影響。加樣及混勻時間的差異，使抗原抗體反響和酶促反響時間不一致，對競爭法及定量檢測影響很大，不留神可能會導(dǎo)致過錯效果或定量不準(zhǔn)。
4. 洗刷是CCK-8試劑盒操作過程中決議實(shí)驗(yàn)勝敗的一個關(guān)鍵步驟。目的是除掉未結(jié)合的免疫反響物，間斷抗原抗體反響，除掉標(biāo)本中與反響無關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反響過程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)。
5. 斷定效果須運(yùn)用CCK-8試劑盒測讀儀，比色法判讀可選擇單波長或雙波長，根據(jù)反響液顏色的不同選用不同波長的濾光片，以空白孔校零測定反響孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有杰出的重復(fù)性。
執(zhí)照.jpg)
